多肽常见问题总结及解决方法(一)干货满满。
01
我应该如何处理和保存多肽？
冻干粉形式的多肽在密封包装后可在室温下稳定运输，溶解的多肽不宜长期保存。
Antrolex多肽保存指南:需要长期保存的多肽应以冻干粉的形式保存在装有干燥剂的密封容器中，并在-20℃下保存，在-80℃下效果更好，可最大程度避免多肽的降解。这种保存方法可以将多肽保存数年，避免被细菌降解氧化，避免二级结构的形成。
拆包:在拆包和称重之前，请在干燥器中将多肽平衡至室温。由于肽往往是吸湿性的，对室温不均衡的肽在开盖后容易凝结，从而降低多肽产品的稳定性。
称重:快速称重您需要的多肽，并将剩余的多肽储存在-20°C或更低的温度下。与其他肽相比，含有半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和谷氨酸的肽保质期较短。
02
多肽怎么溶解？
Antrolex生产的多肽的溶解性很大程度上取决于多肽的极性。酸性蛋白可溶于碱性溶液，而碱性蛋白可溶于酸性溶液。含有大量不带电极性氨基酸残基或疏水氨基酸的疏水肽和中性肽，可溶于少量有机溶剂，如DMSO、DMF、乙酸、乙腈、甲醇、丙醇或异丙醇，然后用水(蒸馏水)稀释。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能溶解在DMSO中，因为DMSO可能导致侧链氧化。
多肽溶出度试验:多肽溶出前取一小部分进行多肽溶出度试验。你需要测试几种不同的溶剂，直到你找到最合适的。超声波处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。(注:超声波处理会引起溶液加热和多肽降解。)
为每个酸性氨基酸赋值-1，包括天冬氨酸(d)、谷氨酸(e)和羧基末端-COOH。每个碱性氨基酸的值为+1，包括精氨酸(R)、赖氨酸(K)、组氨酸(H)和氨基末端-NH2。然后计算整个多肽的电荷数。
如果整个肽的电荷是正的，说明肽是碱性的。先尝试用蒸馏水溶解；如果它不溶于水，那么就尝试用少量的10%-25%的醋酸将其溶解。如果仍然失败，加入一些TFA(10-50微升)使其溶解，然后用水稀释至理想浓度。
如果整个肽的电荷是负电荷，就说明肽是酸性的。酸性多肽可以被PBS(PH 7.4)溶解。如果不溶，加入少量碱性溶剂，如0.1 M碳酸氢铵，然后加水稀释至理想浓度。含有游离半胱氨酸的多肽应溶解在脱气的酸性缓冲液中，因为当PH值大于7时，巯基会迅速氧化成二硫化物。
如果整个肽段的电荷为零，说明肽段是中性的。中性肽通常可溶于有机溶剂。首先，Antrolex建议你尝试加入少量的乙腈、甲醇或异丙醇。对于高度疏水的多肽，可以用少量二甲基亚砜溶解，然后用水稀释到理想浓度。对于含有游离半胱氨酸的肽，应使用DMF代替DMSO。对于有聚集倾向的肽，可以加入6M盐酸胍或8M尿素，然后进行必要的稀释。
为了防止或最小化多肽降解，请将多肽以冻干粉末的形式储存在-20℃下，优选-80℃..如果溶液肽需要保存，最好保存在小样本中，避免反复冻融。解冻后没有用完的样品应该扔掉。细菌降解有时会成为肽液的麻烦，所以请将肽溶解在无菌水或肽液中，过滤除菌。
碱性氨基酸:K，R，H，N末端
酸性氨基酸:D，E，C末端
极性中性氨基酸:F，I，L，M，V，W，y。
非极性疏水氨基酸:G，A，S，T，C，N，Q，P，乙酰基，酰氨基。
例如:
rkdefilgasrhd:(+5)+(-4)=+1被认为是碱性多肽。
ekdefilgasehr:(+4)+(-5)=-1被认为是酸性多肽。
AKDEFILGASEHR:(+4)+(-4) = 0被认为是中性多肽。
03
能否预测一种肽是否可溶？
Antrolex不能通过研究多肽的结构来预测多肽在水中的溶解度。而赖氨酸的ε-氨基和精氨酸的胍基通常有助于预测溶解度，尤其是短肽。相反，含有天冬氨酸和谷氨酸的酸性肽往往不溶于水，而溶于稀氨水或碱性缓冲液。
04
如何选择适合自己研究的多肽纯度？
Antrolex不建议在生物实验中使用粗肽。粗肽可能含有大量非肽杂质，如残留的有机溶剂、清除剂、TFA和其他不完全肽。TFA不能被完全消除，并且递送的肽通常以TFA盐的形式存在。如果残留的TFA影响您的实验，我们建议您使用其他盐形式，如醋酸盐和盐酸盐。这些盐通常比传统的TFA盐贵20-30%以上。这是因为在转化过程中损失了更多的肽，需要更多的原料。
Antrolex为各种项目推荐以下水平的肽纯度:
& gt70%肽纯度
肽微阵列
作为制备抗体的抗原
层析法
酶联免疫吸附试验检测抗血清效价
& gt80%肽纯度
蛋白质印迹(非定量)
酶底物肽(非定量)
封闭肽(非定量)
亲和纯化
磷酸化检测
蛋白质电泳和免疫细胞化学的应用
& gt95%的肽纯度
标准酶联免疫吸附试验和RIA(定量)
受体配体相互作用(定量)
体内和体外
生物测定
酶研究和阻断实验(定量)
核磁共振研究
质谱分析
其他定量检测
& gt98%的肽纯度
合成孔径雷达研究
临床试验
原料药(药物活性成分)
工业产品
X射线晶体的研究
其他敏感实验:酶与底物、受体与配体的相互作用、阻断和竞争实验。
05
多肽的纯度是多少？
多肽的纯度是指HPLC在214nm (214nm为肽链的吸收波长)检测到的目标多肽的含量，水和残留盐不能用紫外分光光度计检测到。其他可以发现的杂质包括:缺失序列(缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列)、截短序列(加帽过程中产生的序列)和去保护不完全序列(在整个合成过程或最后的切割过程中产生的序列)。
多肽的纯化不涉及水和盐。HPLC纯化会产生少量的TFA，例如，游离氨基末端和其它侧链如Arg、Lys和His会产生少量的TFA杂质。通常由Antrolex递送的肽含有痕量TFA和残余水。即使在冻干状态下，由于* * * *的结合能力不同，水分也会不同程度的存在。
纯化前多肽中所含的杂质包括多肽和非多肽物质，纯化后的多肽中所含的杂质除TFA盐外，大部分是序列经过修饰的多肽。
缺失一个或多个氨基酸残基的靶序列。
一种避免产生缺失序列的加帽操作，在缺失序列中会产生截短的序列。
在整个合成过程或最后的裂解过程中产生。
保护基团重新连接到多肽的其他位置。
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什么是净肽含量？
肽的净含量不同于多肽的纯度。净肽含量是指多肽与非肽物质(主要是抗衡离子和水)相比的量。净肽含量可以通过氨基酸分析来确定。一般来说，亲水肽即使在严格的冻干状态下也会吸收少量的水。由于纯化和冻干工艺的原因，不同批次的多肽净含量会有所不同。
07
合成肽怎么样？
不同于天然蛋白质的合成，人工合成的方向是从C端到N端。Antrolex的多肽合成基于PeptideSyn技术的平台，即Fmoc或t-Boc法。具体合成由以下几个循环组成:①去保护:必须用哌啶除去Fmoc保护的柱和单体上氨基的保护基。②活化交联:下一个氨基酸的羧基被活化剂活化。活化的单体与游离氨基反应，交联并形成肽键。③循环:重复这两个反应，直到合成完成。然后将合成的肽切割并从树脂上脱保护。最后沉淀、洗脱、冻干。
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我应该用什么盐的形式？
肽通常以TFA盐的形式递送。如果残留的TFA对您的实验有问题，我们建议使用其他盐形式，如醋酸盐和盐酸盐。这些盐形式通常比普通TFA盐贵20-30%，因为在盐转化过程中会发生肽损失，并且需要更多的原料。
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如何检查合成多肽的质量？
公司对客户提供的所有资料严格保密。Antrolex在发送产品的同时提供免费的HPLC和MS检测结果。公司所有的肽都是用反相色谱提纯的。通过质谱测定肽的分子量来确定产品是否正确，MS检测的结果也能显示大部分主要杂质。如果需要，它还可以提供肽净含量检测，如氨基酸分析或元素分析。这些方法都可以确认多肽的氨基酸组成，都可以作为多肽确认的补充方法。所有交付的肽都达到了客户要求的纯度。那些不符合纯度要求的肽被丢弃。当然，如果客户需要，也可以发给他们。
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公司提供合成肽的包装服务吗？
根据要求，Antrolex可以免费将您的部分或全部订单分成小份。因为少量包装可以避免反复冻融，减少容器的开合次数，减少处理不当或细菌污染的机会，让你的多肽更加稳定。
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