TBIL简介
2 TBIL别名红细胞血清总胆红素
3 TBIL体检3.1考试名称TBIL
3.2分类血液的生化检查>色素测定
3.3测试血液样本
3.4 TBIL(1)改良咖啡因(JG)法测定原理:血清结合胆红素可直接与重氮试剂反应生成偶氮胆红素；在同等条件下，游离胆红素需要一个促进剂来打断胆红素的氢键，然后与重氮试剂反应。咖啡因和苯甲酸钠作为促进剂，醋酸钠可以维持pH，起到加速作用。抗坏血酸(或叠氮化钠)破坏残留的重氮反应，终止与胆红素测量管结合的偶氮反应，阻止游离胆红素的缓慢反应。加入碱性酒石酸钠使最大吸光度从530nm转移到598nm，非胆红素叶黄素和其他红棕色叶黄素产生的吸光度下降到可以忽略，增加了灵敏度和特异性。最终的绿色是蓝色碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的叶黄素的混合物。
(2)胆红素氧化酶法:胆红素氧化酶(BOD)催化胆红素氧化生成胆绿素，胆绿素进一步氧化生成淡紫色化合物。当波长为450nm时，吸光度的下降(△A)与血清胆红素浓度成正比。
3.5试剂(1)改良咖啡因(JG)法:
①咖啡因苯甲酸钠试剂:称取无水乙酸钠41.0g(或ch 3c oona·3H2O 63.0g)，苯甲酸钠38.0g，乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2)0.5g，溶于约500ml蒸馏水中，再加入咖啡因25.0g，搅拌溶解(加入咖啡因后不能加热溶解)，用蒸馏水补足至65430。用滤纸过滤，放入棕色瓶中，室温保存。
②碱性酒石酸钠溶液:称取75.0g氢氧化钠和263.0g酒石酸钠(na 2 C4 H4 o 6·H2O)，溶于蒸馏水中，定容至1000ml，混匀。放入塑料瓶中，在室温下储存。
③5.0g/L亚硝酸钠溶液:称取5.0g亚硝酸钠(nano 2)，溶于蒸馏水中稀释至100ml，混匀，置于棕色瓶中，冰箱保存至少3个月。用10倍稀释至0.5g/L，在冰箱中保持稳定不少于2周。
④5.0g/L对氨基苯磺酸溶液:称取5.0g/L对氨基苯磺酸(NH2C6H4SO3H H2O)，溶于800ml蒸馏水中，加入15ml浓盐酸，用蒸馏水补足至1000ml。
⑤重氮试剂:使用前，将0.5毫升5.0克/升的亚硝酸钠溶液与20毫升5.0克/升的对氨基苯磺酸溶液混合。
⑥5.0g/L叠氮化钠溶液:称取0.5g叠氮化钠，溶于蒸馏水中，稀释至100ml。
⑦胆红素标准溶液
A.一般标准溶液是用游离(未结合)胆红素配制的，所以配制标准溶液的稀释液需要含有白蛋白。可用牛血清白蛋白(40g/L)或人血清代替人血清白蛋白。后一种方法是:采集无溶血、无黄疸、无脂浊的新鲜血清，混合，必要时用细菌滤器过滤。取1毫升过滤后的血清，加入24毫升新鲜生理盐水，混匀。在波长414nm，光程1cm处，用生理盐水调整零点时，吸光度应小于0.100；460纳米处的吸光度应小于0.04。
B.标准溶液中的胆红素必须符合以下标准:25℃时，纯胆红素的氯仿溶液的光学直径为10±0.01mm，波长为453mm，其摩尔吸收系数应在60700±1600范围内；用改进的JG法测得偶氮胆红素的摩尔吸收系数应为74380±866。
C.胆红素储存标准溶液，171 μm ol/L(10mg/DL):准确称取合格胆红素10mg，加入1ml二甲基亚砜，用玻璃棒搅拌制成混悬液。加入2ml 0.05mol/L碳酸钠溶液使胆红素完全溶解，转移至100ml容量瓶中，用稀释血清洗涤数次并合并至容量瓶中，缓慢加入2ml 0.1mol/L盐酸，边加边摇匀(不要用力以免产生气泡)。最后，用稀释的血清补足至100ml。准备过程中尽量避光，用黑纸包裹储存容器。在4℃冰箱中3天就有效，但要求配制后尽快做好标准曲线。
(2)胆红素氧化酶法:
①0.1mol/L TrisHCl缓冲液(pH 8.2:称取Tris 1.211g，胆酸钠172.3mg，SDS432.6mg，溶于90ml蒸馏水中，室温(25 ~ 30℃)下使用65438。该溶液含有4mmol/L胆酸钠和150mmol/L十二烷基硫酸钠。
②BOD溶液:如为冻干，应按说明书要求复溶，但复溶后不宜在冰箱中存放过久(约1周)。如果是液体(可能含有甘油)，可以在冰箱或冰柜中长期保存。BOD储存液的酶活一般在几千~ 1 ~ 20000 U/L，BOD工作液的酶活可根据反应液中BOD最终浓度达到0.3 ~ 1.0U/mL计算。
③胆红素标准溶液:342μmol/L:按JG胆红素测定法配制，或市售符合要求的标准溶液。
3.6操作方法(1)改良咖啡因(JG)法:按表1操作。
充分混合后，波长为600nm，对照管归零，读取各管吸光度；或者用蒸馏水调零，读取测量管和对照管的吸光度，利用测量管和对照管(AUAC)的吸光度之差，在标准曲线上找出相应的胆红素浓度。
(2)胆红素氧化酶法:按表2操作。
加入BOD溶液后立即混匀，置于37℃水浴中5分钟，用分光光度计，用蒸馏水调零，波长为450或460nm，读取各管吸光度。用于控制管的比色杯不得与非控制管的比色杯混合。
3.7正常血清总胆红素:2 ~ 20 μm ol/L(0.1 ~ 1.2mg/dl)。
胆红素氧化酶法和改良JG法(重氮化法)脐带:早产儿:< 34 μ mol/L (< 2.0 mg/DL)足月儿:< 34 μ mol/L (< 2.0 mg/DL) 0 ~ 1天:早产儿:< 137 μ mol/L(。Dl) 3 ~ 5天:早产儿:< 274 μ mol/l (< 16.0 mg/dl)足月儿:< 205 μ mol/l (< 12.0 mg/dl)然后:早产儿:< 34 μ mol/l (< 2.0 mg/dl)。L (0.2 ~ 1.0 mg/dl)成人:1.7 ~ 17.1 μm ol/l(0.1 ~ 1.0mg/dl)
3.8检验结果(1)判断是否有黄疸及其程度的临床意义:STB 17.1 ~ 34.2 μ mol/L为隐性黄疸；34.2 ~ 171 μ mol/L为轻度黄疸；171 ~ 342 μ mol/L为中度黄疸；> 342 μ mol/L为重度黄疸。
(2)判断黄疸性质:完全梗阻性黄疸342 ~ 513 μ mol/L，不完全梗阻171 ~ 266.8 μ mol/L，肝细胞性黄疸17.1 ~ 165438+。
(3)胆红素类型的分类与鉴别:总胆红素和未结合胆红素增高，见于溶血性黄疸、血型不合输血反应、恶性疟疾、新生儿黄疸等。，非结合胆红素主要升高；总胆红素和结合胆红素升高为梗阻性黄疸，如胆结石、肝癌、胰头癌等。，以结合胆红素升高为主；总胆红素、结合胆红素、非结合胆红素均增加为肝细胞性黄疸，如急性黄疸型肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、急性黄色肝坏死。
(4)用于判断肝细胞损伤程度及预后:在肝病中，胆红素浓度明显升高，往往反映肝细胞损伤严重，预后不良。但少数亚急性肝炎可无黄疸。淤胆型肝炎，血清胆红素很高，但肝细胞轻度受损。
(5)有助于了解新生儿溶血的严重程度，制定合理的治疗方案。
(6)再生障碍性贫血和慢性肾炎性贫血患者的STB下降。
3.9注(1)改良咖啡因(JG)法:
①本法测定血清总胆红素在10 ~ 37℃时不受温度变化的影响。颜色在2小时内非常稳定。
②该方法灵敏度高(摩尔吸收系数为74380±866 L·mol-1cm-1)。
③轻度溶血对本方法无影响，但严重溶血可使测定结果降低。原因是血红蛋白与重氮试剂反应生成的产物可破坏偶氮胆红素，也可被亚硝酸氧化成高铁血红蛋白，干扰吸光度测定。
④叠氮化钠能破坏重氮化试剂，终止偶氮反应。任何以叠氮化钠为防腐剂的质控血清均可引起不完全偶氮反应，甚至不显色。
⑤胆红素对光敏感，标准品和标本应尽可能避光。
⑥血脂血和色素干扰测定，应尽量空腹取血。
⑦样品对照管的吸光度一般很接近。如果样品量少，可以省略样品对照管，可以参考其他样品对照管的吸光度。
⑧胆红素大于171μmol/L的标本可减少样本用量，或用生理盐水稀释血清后再做。
⑨测定，至今没有候选参考方法，国内也没有推荐方法。方法不同，反应时间不同，结果不同。时间短，游离胆红素反应少，结合胆红素反应不完全；时间长了，结合胆红素反应完全，但也有部分未结合胆红素参与反应。这是一个很难权衡的问题，没有胆红素标准溶液问题更复杂。
根据Michaelsson和Gambino的方法，Doumas先向血清中加入50 mol/L盐酸，再加入重氮试剂，反应65438±00m in，不仅阻止了未结合胆红素的反应，而且使结合胆红素反应更完全。
Doumas使用的方法:50 mol/L盐酸0.8ml，血清0.2ml，混匀。然后加入0.4ml氮试剂，混匀，室温放置10min，加入32g/L抗坏血酸0.1ml(或20g/L NaN2 0.1ml)，混匀。最后依次加入1.2ml碱性酒石酸钠溶液和1.6ml咖啡因试剂。以未结合胆红素为标准溶液时，标准管操作顺序与JG法测定总胆红素相同，但应在重氮试剂反应后加入抗坏血酸，最后加入50 mnl/L盐酸。
(2)胆红素氧化酶法:
BOD的浓度可根据测定高胆红素血症血清样本所用的产物的反应速度或342μmol/L的标准来确定，即反应能否在5分钟内完成。文献报道反应液中BOD的终浓度为0.18 ~ 1.14U/mL。
(2)在反应体系中存在足够活性的BOD的情况下，反应时间为5min(37℃)，即△A在5min时达到最大值。建议根据使用的试剂盒，用高浓度血清样品或342μmol/L标准溶液检测反应时间。
③溶血性标本可使测定结果降低，与Hb含量和胆红素有关。HB < 1.0g/L影响不大，HB > 1.5g/L时胆红素测定结果明显偏低。
(4)该方法中酶活性的pH曲线在pH 7.3 ~ 9.0之间变化不大，但最适pH为8.0 ~ 8.2。
⑤该方法操作简单，特异性高，线性范围宽，至少低于513 μ mol/L..
3.10相关疾病